TecnoX 2017
Universidad de los Andes.
Low Budget.
Descripción.
Para el TecnoX de este año implementamos una cámara de electroforesis artesanal que habíamos llevado el año pasado, y llevamos el propósito aún más lejos: ¡hicimos todo un protocolo casero de separación de ADN! Esto, al igual que el grueso de nuestro proyecto para este año, con el fin de hacer la ciencia más asequible para todos.
Separación casera de ADN.
Objetivo: Realizar un proceso de electroforesis para la separación de ADN solo mediante el uso de elementos caseros, de bajo precio y de fácil acceso.
Alcance: Este protocolo es dirigido a todas aquellas personas, con conocimientos básicos de Biología Molecular, que deseen realizar una separación de fragmentos de ADN de una manera rápida y económica, especialmente en situaciones donde los reactivos usuales del procedimiento no se encuentran accesibles.
Procedimiento:
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Buffer: Como sustituto del Buffer TAE, tanto para la preparación del gel como para el corrido electroforético, se debe realizar una solución de bicarbonato de sodio y cloruro de sodio, con ambos componentes presentes a una concentración de 8 g.L-1. Se recomienda preparar 500 mL de buffer inicialmente.
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Gel: En este caso, se hará uso de agarosa, al igual que en una electroforesis tradicional de ADN, pero se debe hacer uso del buffer mencionado anteriormente como disolvente. Para el marcaje de los ácidos nucleicos, se puede usar tanto Azul de metileno como violeta de Genciana, los cuales son de fácil acceso en farmacias. Se deben adicionar entre 5 a 7 gotas del colorante escogido una vez la agarosa se haya disuelto en el buffer.
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Cama/ molde para Gel: Como sustituto se puede hacer uso de un recipiente de comida tradicional, como el mostrado a continuación. Adicionar suficiente cantidad de solución de agarosa con el fin de obtener al menos una profundidad de 1.5 cm dentro del recipiente.
Figura 1. Recipiente sustituto de una cubeta de electroforesis.
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Electrodos: Estas superficies de reacción electroquímica se puede realizar con papel aluminio. Para esto se deben tomar láminas de un tamaño aproximado de 17 x 10 y doblarlas por el lado más largo, de tal manera que se genera filamentos de una longitud de 17 cm y de un ancho de 1 cm. Estos deben ser ubicados en los extremos del recipiente, asegurándose que no toquen las paredes del mismo ni el gel.
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Fuente de Poder: Para generar la corriente necesaria para llevar a cabo este procedimiento, se pueden recurrir a baterías tipo C conectadas en serie. Se recomienda el uso de al menos 5 de estas baterías para tener un voltaje de alrededor de 70 V. Para conectar la fuente de poder con los electrodos se recomienda el uso de cables “Aliigator Clips”.
Figura 2. A la izquierda se presenta el sustituto a la cámara de electroforesis, con los electródos unidos a una fuente de poder casera realizada por nosotros. A la derecha, una imagen más detallada del montaje experimental.
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Loading Buffer: Como alternativa a este reactivo es posible usar un líquido viscoso como mil o suero de maíz, de tal manera que se asegura que las muestras de ADN llegan todas al fondo del pozo.
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Recomendaciones: Se sugiere que la preparación de los electrodos y su correcta disposición dentro del recipiente se lleve a cabo antes de la preparación del gel, al igual que el ensamblaje de la fuente de poder. Para la realización de los pozos, en casos done no se encuentre el peine de laboratorio, es posible usar como alternativa una peinilla tradicional. En nuestro caso, usamos una relación 1:5 de ADN y suero, con el fin de hacer una semejanza a cuando se hace uso de un loading buffer de concentración 6 X.
Figura 3. Resultado obtenido después de correr dos muestras de ADN por 30 minutos con el montaje sugerido.
